WikiDer > Grammfärbung

Ein Gramm Fleck von Staphylococcus aureus (grampositive Kokken, lila) und Escherichia coli (gramnegative Bazillen, rot); häufig verwendete Referenzbakterien.

Gramm-Färbung ist eine Methode, um Bakterien Einfärben, um sie unter einem Lichtmikroskop sichtbar zu machen und die Artenerkennung zu unterstützen. Mit Hilfe der Gram-Färbung fallen Bakterien in zwei verschiedene Färbegruppen, die als gram-negativ (rot) oder gram-positiv (blau-violett) bezeichnet werden. Die Methode ist nach ihrem Erfinder, dem dänischen Mikrobiologen, benannt Hans Christian Gram (1853-1938), der 1884 die Technik zur Unterscheidung entwickelte Pneumokokken (Streptococcus pneumoniae) von Klebsiella pneumoniae.^[1]

Gram-Färbung von Bakterien ist aufgrund der unterschiedlichen chemischen und physikalischen Eigenschaften ihrer Bakterien möglich Zellwände. Gram-positive Zellen haben eine dicke Schicht Peptidoglycan in ihrer Zellwand, die den Farbstoff enthält Kristallviolett leicht aufnimmt. Gram-negative Zellen haben eine dünnere Peptidoglycan-Schicht, die das Auswaschen des Kristallvioletts ermöglicht. Diese Bakterien werden durch eine Gegenfärbung rosa gefärbt, normalerweise mit Safranin oder Fuchsin.^[2]

Operation

Die Bakterien werden zuerst mit a . gefärbt Kristallviolett-JodKomplex, dann gewaschen mit Alkohol und dann mit wässrigem gefärbt Fuchsin. Bei grampositiven Bakterien wird der Kristallviolett-Jod-Komplex nicht vom Alkohol weggespült; diese Zellen färben sich blau-violett. Gram-negative Zellen verlieren durch das Alkoholbad den ersten Farbstoff wieder; durch die Nachfärbung mit Fuchsin sie werden danach rot. Wichtig ist jedoch, dass für die Gramfärbung nur Bakterien aus einer 24 Stunden alten Kultur verwendet werden, da in älteren Kulturen eine Gramvariabilität auftreten kann.

Aussage

Der Unterschied zwischen gramnegativen und grampositiven Bakterien wird durch einen Unterschied in der Struktur der Zellwand verursacht:

• Gram-positive Bakterien haben eine dicke Peptidoglycan-Schicht, die für das Alkoholgemisch undurchlässig ist und somit eine Verfärbung verhindert.
• Gram-negative Zellen haben eine sehr dünne Peptidoglycan-Schicht außerhalb der zytoplasmatischen Membran.

Aufbau einer gramnegativen Zellwand

Außerhalb der dünnen Schicht Peptidoglycan Es gibt eine zweite Membran. Diese äußere Membran enthält Lipopolysaccharide (kurz LPS), die der Zelle zusätzlichen Schutz bieten. Diese Lipopolysaccharidmembran kann in 2 Typen unterteilt werden:

• die Kern-Lipopolysaccharid-Membran
• die O-Lipopolysaccharid-Membran
• die Zellwand enthält mehrere Antigene:
  • H-Antigene: Flagellen
  • O-Antigene: Zellwand
  • K-Antigene: Kohlenhydratkapsel

Die Lipopolysaccharid-Kernmembran sitzt näher am Bakterium, während die O-Lipopolysaccharid-Membran die äußerste äußere Oberfläche jedes gramnegativen Bakteriums ist lugol, wodurch die Bakterien die violett-blaue Farbe behalten.

Performance

• Markiere den Anfang von a rutschen mit einem Schreiber.
• Mit a . auf eine Folie anwenden entooge ein Tropfen steril physiologisches Wasser (0,9% NaCl) und verteilen Sie es (physiologisches Wasser wird nur bei einer 'festen Bakterienkultur' benötigt).
• Suspendieren Sie eine sehr kleine Menge Bakterienmaterial im Tropfen und verteilen Sie es über das Glas (über eine Fläche von etwa einem Dollar).
• An der Luft trocknen lassen (oder hoch über der Flamme).
• Fixieren, indem Sie dreimal kurz durch die Flamme gehen und abkühlen lassen.
• Das Präparat mindestens 1 Minute mit Kristallviolettlösung einfärben und dann vorsichtig mit Wasser abspülen.
• Griff mit lugol (eine Lösung von Jod in a Kaliumjodidlösung), 1 Minute.
• Den Lugol abtropfen lassen (nicht abspülen) und mit 96% für 20 Sekunden entfärben Alkohol und mit Wasser abspülen.
• 1 Minute mit Wasser einfärben Fuchsin.
• Mit Wasser gut abspülen, vorsichtig zwischen Filterpapier abtropfen lassen und die Zubereitung an der Luft trocknen lassen. Es kann dann unter der Mikroskop mit Ölimmersion eingesehen werden (kein Deckglas!).

Klinische Bedeutung

Ob die Infektion durch ein grampositives oder ein gramnegatives Bakterium verursacht wird, macht für den Krankheitsverlauf und die Wahl der Therapie einen UnterschiedWiderstand (Unempfindlichkeit) bei grampositiven Bakterien weniger als bei gramnegativen Bakterien, es sei denn, sie enthalten das Enzym Beta-Lactamase produzieren kann. Mit Widerstand gibt es a laktamaseresistent Schmalspektrum-Penicillin als Flucloxacillin oder Zusatz des Laktamasehemmers Clavulansäure offensichtlicher als Breitspektrum-Penicilline, da Amoxicillin.Gram-negative Bakterien sorgen mit ihrer LPS-Schicht dafür, dass der Mensch Immunsystem reagiert stark auf Penicillin; die toten Bakterien sind selbst a themselves Endotoxin das kann dich krank machen. EIN Exotoxin ist ein Gift, das ein (meist grampositives) Bakterium (wie z Diphtherie- oder der Tetanusbakterien oder auch Staphylococcus aureus) produziert.

Beispiele

Einige Beispiele für grampositive (Gramm-)Bakterien sind:

• Streptokokken (einschließlich Ursachen von Karies)
• Lactococcus lactis (wird bei der Käseherstellung verwendet)
• Lactobacillus acidophilus (in fermentierten Milchprodukten angewendet)
• Lactobacillus casei (in fermentierten Milchprodukten angewendet)
• Bacillus anthracis (Milzbrandbakterien)
• Staphylokokken

Einige Beispiele für gramnegative (Gram-) Bakterien sind:

• Salmonellen (einige Arten sind harmlos, andere können Lebensmittelvergiftung oder Typhus- Ursache)
• Campylobacter
• Meningokokken (können Meningitis Ursache (Meningitis)
• Neisseria gonorrhoeae (kann das GeschlechtskrankheitTripper Ursache)
• Pseudomonas aeruginosa (kommt vor als Krankenhausbakterien)
• Chlamydia trachomatis (Ursachen Chlamydiasis)

Junge Kulturen von Clostridium sind meist grampositiv, ältere meist gramnegativ.

In der folgenden Tabelle einige grampositive und -negative Bakterien, die in einer direkten Zubereitung sichtbar sein können:

Siehe auch

• Endotoxin
• Ziehl-Neelsen-Färbung